分享gydF4y2Ba

2023年1月31日gydF4y2Ba ；100 (5)gydF4y2Ba 半岛体育app苹果下载 开放获取gydF4y2Ba

中截断变量gydF4y2BaRFC1gydF4y2Ba小脑性共济失调、神经病和前庭反射综合征gydF4y2Ba

里卡多。RoncogydF4y2Ba，gydF4y2Ba塞西莉亚PerinigydF4y2Ba，gydF4y2Ba里卡多。CurrogydF4y2Ba，gydF4y2Ba纳塔莉亚含蓄gydF4y2Ba，gydF4y2Ba斯特凡诺FacchinigydF4y2Ba，gydF4y2Ba爱丽丝GennarigydF4y2Ba，gydF4y2Ba罗伯特·西蒙gydF4y2Ba，gydF4y2Ba斯凯斯图尔特gydF4y2Ba，gydF4y2Ba萨拉伊gydF4y2Ba，gydF4y2BaElisa VegezzigydF4y2Ba，gydF4y2Ba的Ilaria QuartesangydF4y2Ba，gydF4y2Ba阿玛El-SaddiggydF4y2Ba，gydF4y2Ba盖拉文gydF4y2Ba，gydF4y2Ba阿里安娜TuccigydF4y2Ba，gydF4y2Ba阿格涅斯卡SzymuragydF4y2Ba，gydF4y2Ba路易斯·爱德华多·德·法里亚斯gydF4y2Ba，gydF4y2Ba亚历山大·加里gydF4y2Ba，gydF4y2Ba梅根DelfeldgydF4y2Ba，gydF4y2Ba普里西拉KandikatlagydF4y2Ba，gydF4y2BaNifang妞妞gydF4y2Ba，gydF4y2BaSanjukta TawdegydF4y2Ba，gydF4y2Ba约瑟夫·肖gydF4y2Ba，gydF4y2Ba詹姆斯赶gydF4y2Ba，gydF4y2Ba玛丽·m·赖利gydF4y2Ba，gydF4y2Ba尼克·w·伍德gydF4y2Ba，gydF4y2Ba名叫Emmanuele CrespangydF4y2Ba，gydF4y2Ba克里斯托弗·戈麦斯gydF4y2Ba，gydF4y2Ba金云陈海伦gydF4y2Ba，gydF4y2BaJeremy Dan SchmahmanngydF4y2Ba，gydF4y2Ba大卫GosalgydF4y2Ba，gydF4y2Ba亨利HouldengydF4y2Ba，gydF4y2BaSoma DasgydF4y2Ba，gydF4y2Ba安德里亚CortesegydF4y2Ba
第一次出版gydF4y2Ba2022年10月26日，gydF4y2Ba DOI: https://doi.org/10.1212/WNL.0000000000201486gydF4y2Ba
完整的PDFgydF4y2Ba
简式gydF4y2Ba
引用gydF4y2Ba
权限gydF4y2Ba

做出评论gydF4y2Ba

看到评论gydF4y2Ba

下载gydF4y2Ba
792gydF4y2Ba

分享gydF4y2Ba

摘要gydF4y2Ba

背景与目的gydF4y2Ba小脑共济失调、神经病变和前庭反射综合征(CANVAS)是一种常染色体隐性神经退行性疾病，其特征为成人发病和缓慢进展的感觉神经病变、小脑功能障碍和前庭功能障碍。在大多数情况下，该病是由双等位基因(AAGGG)引起的。gydF4y2BangydF4y2Ba复制因子复合体亚基1的第二个内含子重复扩增(gydF4y2BaRFC1gydF4y2Ba)．然而，少数典型的CANVAS病例不携带常见的双等位基因重复展开。本研究的目的是通过识别CANVAS的序列变异来扩展CANVAS的基因型谱gydF4y2BaRFC1gydF4y2Ba-与此条件相关的编码区域。gydF4y2Ba

方法gydF4y2Ba15人被诊断为CANVAS，只携带1个杂合子(AAGGG)gydF4y2BangydF4y2Ba扩张gydF4y2BaRFC1gydF4y2Ba进行全基因组测序或全外显子组测序，以测试第二种变体的存在gydF4y2BaRFC1gydF4y2Ba或者其他不相关的基因。评估截断变量对gydF4y2BaRFC1gydF4y2Ba我们检测了患者来源细胞系上的RFC1转录本和蛋白水平。gydF4y2Ba

结果gydF4y2Ba我们从5个不相关的家族中确定了7例患者，临床定义的CANVAS携带杂合子(AAGGG)。gydF4y2BangydF4y2Ba与第二个截断变体一起展开gydF4y2Ba在反式gydF4y2Ba在gydF4y2BaRFC1gydF4y2Ba其中包括:c.1267C>T (p.Arg423Ter)， c.1739_1740del (p.Lys580SerfsTer9)， c.2191del (p.Gly731GlufsTer6)和c.2876del (p.Pro959GlnfsTer24)。含有c.1267C>T (p.Arg423Ter)或c.2876del (p.Pro959GlnfsTer24)变体的患者成纤维细胞表现出无意义介导的mRNA衰变和RFC1转录物和蛋白质的减少。gydF4y2Ba

讨论gydF4y2Ba我们的报告扩展了RFC1疾病的基因型谱。完整的gydF4y2BaRFC1gydF4y2Ba在受典型CANVAS影响并携带单等位基因(AAGGG)的病例中，建议进行测序gydF4y2BangydF4y2Ba扩张。此外，它进一步阐明了RFC1 CANVAS的发病机制，因为它支持这种复杂的神经退行性疾病下功能丧失机制的存在。gydF4y2Ba

术语表gydF4y2Ba

帆布gydF4y2Ba＝gydF4y2Ba
小脑性共济失调、神经病和前庭反射综合征gydF4y2Ba；gydF4y2Ba
ESPgydF4y2Ba＝gydF4y2Ba
外显子组测序项目gydF4y2Ba；gydF4y2Ba
NHLBIgydF4y2Ba＝gydF4y2Ba
国家心肺血液研究所gydF4y2Ba；gydF4y2Ba
RFC1gydF4y2Ba＝gydF4y2Ba
复制因子复亚基1gydF4y2Ba；gydF4y2Ba
VVORgydF4y2Ba＝gydF4y2Ba
视觉增强的前庭-眼反射gydF4y2Ba；gydF4y2Ba
韦斯gydF4y2Ba＝gydF4y2Ba
whole-exome测序gydF4y2Ba；gydF4y2Ba
WGSgydF4y2Ba＝gydF4y2Ba
全基因组测序gydF4y2Ba

小脑性共济失调、神经病变和前庭反射综合征(CANVAS)是一种常染色体隐性神经退行性疾病，其特征是由感觉神经元、前庭系统和小脑的当代损伤引起的成人发病和缓慢进行性共济失调。gydF4y2Ba1gydF4y2Ba，gydF4y2Ba-gydF4y2Ba，gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba在大多数情况下，该病是由双等位基因(AAGGG)引起的。gydF4y2BangydF4y2Ba复制因子复合体亚基1的第二个内含子重复扩增(gydF4y2BaRFC1gydF4y2Ba)基因。gydF4y2Ba4gydF4y2Ba，gydF4y2Ba-gydF4y2Ba，gydF4y2Ba21gydF4y2BaRFC1gydF4y2Ba编码复制因子C的大亚基，这是一种5亚基DNA聚合酶辅助蛋白，在复制期间和DNA损伤后需要协调合成两条DNA链。gydF4y2Ba

值得注意的是，先前对双等位基因(AAGGG)的研究gydF4y2BangydF4y2Ba使用患者细胞系和1个死后大脑的扩增载体没有显示出RFC1 RNA或蛋白质的减少，也没有显示出DNA复制和修复的明显功能障碍。gydF4y2Ba4gydF4y2Ba，gydF4y2Ba9gydF4y2Ba这是令人困惑的，因为隐性遗传条件通常与突变基因的功能丧失有关，这表明RFC1 CANVAS的发病机制可能涉及更复杂的机制。在这项研究中，我们介绍了前7例病例，来自5个不相关的家族，受典型的CANVAS表型携带杂合(AAGGG)的影响。gydF4y2BangydF4y2Ba与第二个截断变量一起重复展开gydF4y2BaRFC1gydF4y2Ba。gydF4y2Ba

方法gydF4y2Ba

病人gydF4y2Ba

DNA样本收集于2019年1月至2022年5月期间，从英国伦敦皇后广场神经病学研究所(英国伦敦)国立神经病学和神经外科医院、芝加哥大学遗传服务实验室(芝加哥)以及国际上通过合作中心诊断为共济失调、感觉神经病或CANVAS的患者。半岛投注体育官网根据感觉神经病变、小脑功能障碍和双侧前庭反射的特征组合，患者被诊断为CANVAS。gydF4y2Ba1gydF4y2Ba

RFC1gydF4y2Ba测试gydF4y2Ba

RFC1gydF4y2Ba基因检测采用重复引物PCR和侧翼PCR，如前所述。gydF4y2Ba4gydF4y2Ba，gydF4y2Ba21gydF4y2Ba当有足够的DNA可用时，也进行Southern blotting。gydF4y2Ba4gydF4y2Ba

全基因组测序和全外显子组测序gydF4y2Ba

被诊断为CANVAS且仅携带1个杂合子(AAGGG)的个体gydF4y2BangydF4y2Ba扩张gydF4y2BaRFC1gydF4y2Ba进行全基因组测序(WGS)或全外显子组测序(WES)。WGS和WES由Macrogen(荷兰)或芝加哥大学进行。在Macrogen，使用Novaseq 6000系统(Illumina)生成配对端测序reads (150 bp)，并使用Burrows-Wheeler Aligner与GRCh38对齐。gydF4y2Ba22gydF4y2Ba每个样本的平均覆盖率为40倍。根据基因组分析工具包HaplotypeCaller工作流调用变体gydF4y2Ba23gydF4y2Ba并用ensemble Variant Effector Predictor进行注释。gydF4y2Ba24gydF4y2Ba根据分离、小等位基因频率(在1000个基因组计划中<0.0001，gydF4y2Ba25gydF4y2Ba国家心肺血液研究所(NHLBI) GO外显子组测序项目(ESP)(外显子组变体服务器，NHLBI GO ESP，gydF4y2Ba26gydF4y2Ba或者基因组聚合数据库gydF4y2Ba27gydF4y2Ba)，进化守恒，以及编码变异致病性的计算机预测。芝加哥大学的WES过程与以下例外相似:使用IDT xGEN外显子组研究试剂盒(Integrated DNA Technologies)进行外显子组测序，序列与GRCh37对齐。使用经过验证的自定义生物信息学管道对变体进行注释和评估。gydF4y2Ba

RFC1gydF4y2Ba患者来源细胞系的表达研究gydF4y2Ba

评估截断变量对gydF4y2BaRFC1gydF4y2Ba收集来自家族1中受影响(I-1和I-2)和未受影响(I-3)个体的患者成纤维细胞，来自家族2的病例II，携带双等位AAGGG扩增的患者(n = 5)，年龄匹配和性别匹配的对照组(n = 5)，并在添加15%胎牛血清(Euroclone)的Dulbecco's Modified Eagle Media (DMEM)中培养。实时定量PCR (RT-qPCR)和Western blotting在生物独立的样本上重复了至少两次，结果相似。gydF4y2Ba

RFC1gydF4y2BaHEK293细胞系的基因沉默gydF4y2Ba

为了验证抗rfc1 -p140小鼠单克隆抗体(1:2 ' 500,Ulrich Hubscher的善意礼物)的特异性gydF4y2Ba28gydF4y2Ba)，我们表演gydF4y2BaRFC1gydF4y2Ba中所述的基因沉默。gydF4y2Ba29gydF4y2Ba简单地说，来自欧洲细胞培养收藏(ECACC)的HEK293人成神经细胞瘤在T75瓶中培养，并在DMEM (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA)中保存，添加10%胎牛血清(Thermo Fisher Scientific)， 37°C, 5% COgydF4y2Ba2gydF4y2Ba湿润孵化器。HEK293以≈80%合流分裂，并在6孔板中重复(每孔800.000个细胞)。沉默RFC1, 25 pmol的siRNA池(siRFC1: 5 ' -GUAAAUAGCUCCCGUAAAG-3 ';5 ' -GGAAUUAAUUGGCCUGAUA 3 ';5“-GUCCAAAGAUCUAAUAAGA-3”;5 ' - cauaugcgaugugaccua -3 ')或非靶向siRNA (D-001810-10-05, Thermo Fisher scientific)与7.5 μL Lipofectamine RNAiMAX (Invitrogen)按照制造商的转染方案混合，并应用于6孔板的每一孔。48小时后，收集转染细胞进行后续分析。gydF4y2Ba

实时定量PCRgydF4y2Ba

用RNAeasy Mini kit (Qiagen, Hilden, Germany)从成纤维细胞中提取总RNA，并用无RNA的DNase I (Qiagen)处理。所有样本使用500ng总RNA合成互补DNA (cDNA)，使用SuperScript III第一链cDNA合成试剂盒(Invitrogen, Waltham, MA)和低聚物(dT)18和随机六聚物引物的等量混合物。使用Power SYBR Green Master Mix (Applied Biosystems, Waltham, MA)进行实时qRT-PCR，并使用QuantStudio 7 Flex实时PCR系统(Applied Biosystems)进行测量。gydF4y2BaRFC1gydF4y2Ba表达水平(正向:5 ' -CTTCGCGGGAGAAGTTGTTG-3 '，反向:5 ' -ATTTCCGAATGTCCATCGCAG-3 ')归一化为GAPDH(正向= 5 ' - tgcaccaccaactgtggtcatagg -3')和RPL10(正向= 5 ' -AATCTCCAGGGGCACCATT-3 '，反向= cgctggcccactttgt -3')。扩增后的转录物使用比较CT法进行量化，并以归一化折叠表达变化(2gydF4y2BaΔΔCtgydF4y2Ba)．gydF4y2Ba

为了评估个体II中C .2876del (p.Pro959GlnfsTer24)截断变体映射到外显子22的等位基因状态，我们利用了外显子19上存在的C . 2511t >C (p.Ser837=) (rs2066782)同义变体，该变体是包含(AAGGG)n重复扩展的同一单倍型的一部分。通过包括外显子17-23(正向:5 ' -TCTTCGTTTTCAAAGACCTCGGG-3 '，反向:5 ' -TTTGCCACCCCAGCTGCTG-3 ')的接触式PCR扩增患者成纤维细胞的cDNA，并对外显子19(正向:5 ' - tgggagccaatcaagatcaga -3 '，反向:5 ' -GCTGCAAACACTTTCCGGGC-3 ')和外显子22(正向:5 ' - ctggagtcttctgcccgc -3 '，反向:5 ' - ggtcaagggctgtacaagtgtgca -3 ')使用正向和反向引物进行Sanger测序。为了进行比较，外显子19(正向:5 ' -GGTGTGCACGAAGTAAAGCA-3 '，反向:5 ' -ATTCCACAGGCATACCAAGG-3 ')和22(正向:5 ' -TGGATCAAGGTGTGTACCGC-3 '，反向:5 ' -CCCGAACAGAGTAATCCCAC -3 ')的PCR和测序gydF4y2BaRFC1gydF4y2Ba对病例II的gDNA也进行了检测。gydF4y2Ba

西方墨点法gydF4y2Ba

在冷PBS 1X中收集细胞，重悬于放射免疫沉淀试验缓冲液(1% Nonidet P-40, 50 mM Tris-HCl [pH 8.0]， 150 mM NaCl, 0.1% SDS, 0.1% DOC)中，补充1X蛋白酶抑制剂鸡尾酒(Sigma Aldrich, St. Louis, MO)和1X磷酸酶抑制剂鸡尾酒(Roche Diagnostics, Basel, Switzerland)，在冰上孵育20分钟，然后离心(6 ' 200,15分钟)gydF4y2BaggydF4y2Ba， 4°C)，收集含蛋白上清液。蛋白质裂解物浓度使用蛋白质测定染色试剂浓缩物(Bio-Rad, Hercules, CA)进行评估。裂解产物(25 μg)与1X裂解缓冲液(300 mM Tris-HCl [pH 6.8]， 10% SDS, 40%甘油，600 mM DTT, 5% 2-巯基乙醇和0.2%溴酚蓝)混合，在95°C变性5分钟。样品在8% SDS-聚丙烯酰胺凝胶中在1X Tris/甘氨酸/SDS运行缓冲液中分离，并使用Turbo Transfer Pack (Bio-Rad)转移到硝化纤维膜上。然后将膜在6%的脱脂牛奶中堵塞1小时，并在4°C与2.5%的脱脂牛奶中与以下识别人类蛋白质的抗体孵育过夜:抗rfc1 -p140小鼠单克隆抗体(1:2 ' 500,Ulrich Hubscher的善意礼物gydF4y2Ba28gydF4y2Ba)，抗gapdh小鼠单克隆(cat。不。ab8245;1:10,000;Abcam)，或抗- α-肌动蛋白(cat。No. 3134, Cell Signaling)。通过评估与sirff1 - hek293细胞系的结合，验证了抗rff1 -p140的特异性。一抗用辣根过氧化物酶偶联二抗(抗鼠，猫。不。115-035-146; 1:5′000; Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc, West Grove, PA) for 1 hour at room temperature. Protein bands were visualized using an enhanced chemiluminescent reagent (Westar Eta C Ultra 2.0; Cyanagen, Bologna BO, Italy). The intensity of the band in each sample was quantified using QuantityOne software (Bio-Rad Laboratories, Inc), corrected for the intensity of the corresponding band obtained with the anti-GAPDH antibody, and normalized to the control sample.

RNA-seqgydF4y2Ba

在UCL基因组学进行文库制备和RNAseq。利用STAR将Reads与hg38人类基因组构建进行比对(c 2.7.7a)。gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba使用umi_tools(版本1.1.1)对BAM文件进行排序并标记重复读取。gydF4y2Ba31gydF4y2Ba与人类基因(Gencode v35)重叠的对齐reads使用featu复述(version 2.0.1)进行计数。gydF4y2Ba32gydF4y2Ba

标准方案批准、注册和患者同意gydF4y2Ba

这项研究得到了当地机构伦理委员会的批准。从参与研究的年龄在18岁以上的患者中获得书面知情同意。gydF4y2Ba

数据可用性gydF4y2Ba

本研究的匿名数据将根据任何合格的研究人员的要求共享。gydF4y2Ba

结果gydF4y2Ba

RFC1gydF4y2Ba基因研究gydF4y2Ba

作为一部分gydF4y2BaRFC1gydF4y2Ba在皇后广场神经病学研究所和芝加哥大学的基因检测中，我们从13个临床诊断为典型CANVAS的家庭中确半岛投注体育官网定了15名患者，他们只携带1个杂合(AAGGG)。gydF4y2BangydF4y2Ba扩大等位基因。进行WES或WGS，并在gydF4y2BaRFC1gydF4y2Ba其中7人来自5个不相关的家庭(5/ 13,38%)，在本研究中进一步描述(gydF4y2Ba图1gydF4y2Ba)．没有其他相关变量，包括拼接或非编码变量gydF4y2BaRFC1gydF4y2Ba或其他基因，在其余7个家族中被鉴定出来。gydF4y2Ba

图1gydF4y2Ba
图1gydF4y2Ba 中截断变量gydF4y2BaRFC1gydF4y2Ba在复合杂合状态下致病(AAGGG)n膨胀导致CANVASgydF4y2Ba

(A)家族血统。(B)显示本研究中确定的突变位置的示意图gydF4y2BaRFC1gydF4y2Ba基因(NM_002913.5)。缩写:CANVAS =小脑性共济失调、神经病和前庭反射综合征;gydF4y2BaRFC1gydF4y2Ba=复制因子复合亚基1。gydF4y2Ba

例描述gydF4y2Ba

家庭1gydF4y2Ba

I-2因进行性失衡、手脚感觉减退和自55岁中期以来的示波器而接受神经学评估。她还从15岁开始抱怨慢性咳嗽。gydF4y2Ba

61岁时I-2神经系统检查显示步态广泛，Romberg阳性。有凝视诱发的眼球震颤、追逐中断、双侧前庭眼反射缺失和视觉增强前庭眼反射改变。包括面部在内的全身对针刺的感觉减弱，而上肢胸骨和下肢髂前上棘对振动的感觉减弱。关节位置得以保留。上肢和下肢的反射能力降低。指鼻部和后跟胫部有轻度运动障碍。音调、肌肉体积和力量都是正常的(视频1)。gydF4y2Ba

神经传导检查显示上肢和下肢感觉动作电位缺失，但运动检查正常。MRI显示蠕虫萎缩累及腹侧和背侧小叶，脊髓实质体积损失累及整个脊髓，优先累及背侧，其中轻度纵向广泛的T2高信号累及背侧柱。前庭神经测试证实双侧前庭神经功能衰竭。gydF4y2Ba

在她的家庭中，她现年62岁的姐姐(I-1岁)也报告了类似的症状，而他们的弟弟(I-3岁)和他们的父母未受影响。gydF4y2Ba

I-1描述了她从20岁出头开始的慢性咳嗽。从她40多岁开始，她就开始抱怨走路不稳，在黑暗中更严重，几年后又出现了神经性疼痛和与头部运动有关的示波器，走路时难以阅读路标。病情进展，患者出现构音障碍、吞咽困难、自主神经累及症状性体位性低血压。在62岁时的检查和调查支持CANVAS的临床诊断。gydF4y2Ba

I-3未报告任何症状。52岁时，他的检查和神经传导研究正常。gydF4y2Ba

RFC1gydF4y2BaI-1和I-2的检测显示存在杂合(AAGGG)。gydF4y2BangydF4y2Ba1000次重复扩展与非扩展(AAAAG)gydF4y2Ba11gydF4y2Ba等位基因。I-3还携带了(AAGGG)gydF4y2Ba1000gydF4y2Ba在复合杂合子状态下的膨胀与(AAAGG)的小非致病性膨胀gydF4y2Ba60gydF4y2Ba在另一个等位基因上重复。因此，在I-1和I-2中进行WGS并显示，但在I-3中没有，在中存在c.1267C>T (p.Arg423Ter)截断变体gydF4y2BaRFC1gydF4y2Ba(NM_002913.5)。gydF4y2Ba

家庭2gydF4y2Ba

病例II是一位64岁的男性，他自40多岁以来一直抱怨进行性失衡，在黑暗中更严重，与麻木、感觉异常和四肢弥漫性神经性疼痛相关，并伴有影响躯干的强烈冷痛感。示波器和提示自主神经功能衰竭的症状，包括伴晕厥发作的直立性低血压、膀胱、肠道和性功能障碍，后来也有报道。他是被收养的，从未与亲生家人有过任何联系。gydF4y2Ba

64岁时检查显示双侧前庭反射，同时有小脑功能障碍和感觉障碍的迹象。脑MRI显示轻度小脑萎缩。神经传导研究显示存在严重的感觉神经病变，在整个过程中没有感觉动作电位，但正常的运动研究。前庭神经测试显示双侧前庭神经反射。gydF4y2Ba

RFC1gydF4y2Ba进行了检测，发现存在杂合子(AAGGG)。gydF4y2BangydF4y2Ba中重复展开gydF4y2BaRFC1gydF4y2Ba。采用WES鉴定了c.2876del (p.Pro959GlnfsTer24)的第二个截断变体gydF4y2BaRFC1gydF4y2Ba。由于缺乏家族成员，直接分离变异是不可能的。然而，进行了mRNA测序研究，并提供了(AAGGG)gydF4y2BangydF4y2Ba重复扩增和c.2876del (p.Pro959GlnfsTer24)变体存在于不同的等位基因上(见段落RFC1表达研究和gydF4y2Ba图2 dgydF4y2Ba)．gydF4y2Ba

图2gydF4y2Ba
图2gydF4y2Ba 无意义介导的mRNA衰变和单倍功能不全gydF4y2BaRFC1gydF4y2Ba

(A) Real-Time qPCR显示减少40%gydF4y2BaRFC1gydF4y2Ba2例携带c.1267C> T/(AAGGG)的CANVAS患者的mRNA表达gydF4y2Ba经验值gydF4y2Ba(n = 2)或c.2876del/(AAGGG)gydF4y2Ba经验值gydF4y2Ba(n = 1)突变与健康对照组(n = 4，gydF4y2BapgydF4y2Ba值= 0.0305)和双等位基因(AAGGG)exp/(AAGGG)exp CANVAS情况(n = 4，gydF4y2BapgydF4y2Ba值< 0.0001)。与双等位基因CANVAS病例相比，对照组无显著降低(gydF4y2BapgydF4y2Ba= 0.154) (B) RNAseq证实显著降低gydF4y2BaRFC1gydF4y2Ba与健康对照组相比，I-1和I-2患者转录水平的变化(n = 6，gydF4y2BapgydF4y2Ba= 0.0086)。(C)来自家族1个体的RNAseq和WGS的二进制比对图(BAM)数据显示，在I-1和I-2中包含C . 1267c >T突变的reads(绿色)与从第二个(棕色)衍生的转录本的reads映射相比，在WGS上两个等位基因的表达相等，这支持了C . 1267c >T突变转录本的无意义介导衰变(NMD)的存在。在c.1267称为胞嘧啶和胸腺嘧啶百分比的示意图表示gydF4y2BaRFC1gydF4y2Ba家族1的WGS和RNAseq。(D)病例二RFC1 gDNA和mRNA测序。左上角电泳图显示在gDNA上存在c.2876del移码变体，由于无意义介导的衰变，在mRNA测序上不明显(左下角)。相反，碱基2511的胞嘧啶等位基因，在gDNA中杂合表达，是(AAGGG)的一部分。gydF4y2BangydF4y2Ba由于含有c.2876del截断变异的第二个等位基因的无意义介导的衰变，该扩增单倍型在mRNA测序中似乎是“纯合”的。总之，这些发现支持了(AAGG)在trans中的位置。gydF4y2BangydF4y2Ba在本例中重复展开和c.2876del变体。(E) Western blotting显示全长减少50%gydF4y2BaRFC1gydF4y2BaCANVAS患者(I-1和I-2)与健康对照组(对照组)及其未受影响的兄弟姐妹(I-3)的蛋白表达(红色箭头)(gydF4y2BapgydF4y2Ba= 0.0263)，同时siRFC1转染HEK293细胞的RFC1减少。使用非靶向sirna转染细胞作为对照。gydF4y2BaRFC1gydF4y2Ba密度测量值归一化为GAPDH。双等位基因(AAGGG)exp/(AAGGG)exp CANVAS患者源性成纤维细胞(n = 5)与健康对照源性成纤维细胞(n = 5)之间未见RFC1蛋白表达显著降低(gydF4y2BapgydF4y2Ba= 0.94)。缩写:CANVAS =小脑性共济失调，神经病，前庭反射综合征;RFC1 =复制因子复合体亚基1。gydF4y2Ba

家庭3gydF4y2Ba

病例III是一名41岁的女性，自30岁以来报告进行性失衡和行走困难，特别是在黑暗中。值得注意的是，她在学校里总是觉得自己笨手笨脚，不擅长运动。慢性咳嗽从年轻时就有报道。后来还发现示波器和手灵巧受损，而构音障碍从40岁开始就很明显。病情发展迅速，她从38岁开始使用助行器，40岁开始使用轮椅。41岁时的检查显示凝视诱发和下行眼球震颤和眼跳追逐。脚趾的振动感觉和本体感觉减少，而下肢的膝盖和上肢的手腕的针刺感觉减少。全身肌肉张力和力量正常，四肢反射增强。gydF4y2Ba

双侧前庭损伤的年龄为30岁，而最近的调查显示小脑萎缩和感觉神经病变的关系。gydF4y2Ba

RFC1gydF4y2Ba进行了检测，发现存在杂合子(AAGGG)。gydF4y2BangydF4y2Ba中重复展开gydF4y2BaRFC1gydF4y2Ba。采用WES鉴定了c.1739_1740del (p.Lys580SerfsTer9)的第二个截断变体gydF4y2BaRFC1gydF4y2Ba。随后进行了父母测试，确定了(AAGGG)的存在。gydF4y2BangydF4y2Ba在该个体的母亲中重复扩增，在该个体的父亲中发现c.1739_1740del (p.Lys580SerfsTer9)截断变体，证实该变体和重复扩增是正确的gydF4y2Ba在反式gydF4y2Ba配置。gydF4y2Ba

家庭4gydF4y2Ba

病例IV-1在45岁左右报告远端感觉丧失、瘙痒和灼痛，近端进展到躯干和面部，随后不久出现不平衡，特别是闭眼、跌倒、言语不清、侧视视力模糊和直立性低血压。自20岁起有干咳报告。47岁时的检查显示步态正常，但双人行走有困难。有凝视诱发的眼震、眼跳追逐、VVOR异常和轻度构音障碍。反应很灵敏，但运动室在其他方面完好无损。四肢和躯干对针刺的感觉减少，对膝盖的震动减少，本体感觉正常。调查与全面的CANVAS保持一致，记录了前庭反射、感觉神经病变和小脑萎缩的存在。gydF4y2Ba

RFC1gydF4y2Ba进行了检测，发现存在杂合子(AAGGG)。gydF4y2BangydF4y2Ba中重复展开gydF4y2BaRFC1gydF4y2Ba。采用WES鉴定了c.2191del (p.Gly731GlufsTer6)的第二个截断变体gydF4y2BaRFC1gydF4y2Ba。据描述，该患者有一个54岁的哥哥姐姐(IV-2)被诊断为共济失调。由于严重的吞咽困难，他目前只能坐轮椅，需要使用喂食管。gydF4y2BaRFC1gydF4y2Ba在这个年长的兄弟姐妹中分析发现了(AAGGG)的存在gydF4y2BangydF4y2Ba重复展开和c.2191del (p.Gly731GlufsTer6)截断变体。亲本分析确定父基因中存在c.2191del (p.Gly731GlufsTer6)变异，而(AAGGG)基因中存在c.2191del变异。gydF4y2BangydF4y2Ba在母体中重复展开，确认变体和重复展开处于反式配置中。gydF4y2Ba

家庭5gydF4y2Ba

病例V报告在26岁时出现不平衡，特别是在夜间，多年来不断进展，并与慢性咳嗽和轻度构音障碍相关。33岁时的检查显示步态广泛，Romberg阳性。侧视、眼跳追逐、头冲动试验阳性加重的强拍性眼震。反应敏捷，值得注意的是，持续踝阵挛的下肢张力增加。然而，能量正常，巴宾斯基阴性。浅表感觉随远端至近端梯度降低，脚趾本体感觉降低。轻度指鼻和跟胫共济失调。gydF4y2Ba

调查显示存在纯粹的感觉神经病变，运动神经传导正常，脑MRI显示中度弥漫性小脑和蚓体积损失，前庭测试异常。gydF4y2Ba

RFC1gydF4y2Ba进行了检测，发现存在杂合子(AAGGG)。gydF4y2BangydF4y2Ba中重复展开gydF4y2BaRFC1gydF4y2Ba。采用WES鉴定了c.1267C>T (p.Arg423Ter)的第二个截断变体gydF4y2BaRFC1gydF4y2Ba。该变异与家族1中检测到的相同。对该患者父亲的分析表明，他携带c.1267C>T (p.Arg423Ter)截断变异，不携带(AAGGG)gydF4y2BangydF4y2Ba重复扩张。该患者的母亲无法进行分析。这一结果支持了变体和重复展开均为反式构型。gydF4y2Ba

RFC1gydF4y2Ba表达的研究gydF4y2Ba

确定观察到的截断变异体是否会导致无意义介导的mRNA衰变和单倍不足gydF4y2BaRFC1gydF4y2Ba，我们评估了基因的RNA和蛋白质表达(gydF4y2Ba图2,A-EgydF4y2Ba)．RT-qPCR对从受影响的I-1, I-2和II个体的成纤维细胞中提取的RNA进行了检测，结果显示RNA水平降低gydF4y2BaRFC1gydF4y2BamRNA与未受影响的兄弟姐妹I-3、双等位AAGGG扩增携带者和对照组相比(gydF4y2Ba图2一个gydF4y2Ba)．来自I-1和I-2的RNAseq证实存在约50%的减少gydF4y2BaRFC1gydF4y2Ba成绩单水平(gydF4y2Ba图2 bgydF4y2Ba)．值得注意的是，表达量的降低是由于含有c.1267C>T变体的读取数较低，其占该区域总读取数的10%不到，而在WGS上2个等位基因的比例相等(gydF4y2Ba图2 cgydF4y2Ba)．在病例II中，触地PCR和Sanger测序也显示含有c.2876del截断变异的等位基因发生无义介导的衰变。值得注意的是，(p.Ser837 =) (rs2066782)同义变体，它是包含(AAGGG)的单倍型的一部分。gydF4y2BangydF4y2Ba扩增，在患者的gDNA上显示为杂合子，但在cDNA上显示为“纯合子”，这表明c.2876del变体和(AAGGG)gydF4y2BangydF4y2Ba扩展存在于独立的等位基因上(gydF4y2Ba图2 dgydF4y2Ba)．总之，这些发现表明，包含RFC1中截断变异的转录本经历了无意义介导的衰变，导致RNA降解。因此，免疫印迹显示，与双等位AAGGG扩增携带者和对照相比，受影响个体的成纤维细胞和siRFC1 HEK293细胞系中140 KD全长RFC1蛋白的一致减少，而没有检测到截断的异型(gydF4y2Ba图2 egydF4y2Ba)．gydF4y2Ba

讨论gydF4y2Ba

该研究报告了与rfc1canvas截断变异相关的第一例病例gydF4y2BaRFC1gydF4y2Ba基因。虽然双等位基因重复扩增的分子结果gydF4y2BaRFC1gydF4y2Ba仍未解决，观察到患者携带复合杂合截断变异/(AAGGG)gydF4y2BangydF4y2Ba中重复展开gydF4y2BaRFC1gydF4y2Ba，导致RFC1表达减少，这对未来疾病发病机制的研究具有重要意义，因为它支持了这种情况下功能丧失机制的存在。gydF4y2Ba

DNA氧化损伤的有效修复是神经元的基本功能，因为它们不复制，蛋白质周转有限。gydF4y2Ba33gydF4y2Ba因此，即使复制因子复杂机制的微小损伤也可能对这种细胞类型有害。事实上，在细胞和动物模型中，RFC1的完全缺失与生命不相容，并且基于对照数据库数据，该基因对单倍缺陷高度不耐受。gydF4y2Ba27gydF4y2Ba为了验证这一假设，有必要对疾病相关组织进行进一步的研究。gydF4y2Ba

患者携带一个完全无功能的等位基因和第二个杂合子(AAGGG)gydF4y2BangydF4y2Ba与大多数携带双等位基因(AAGGG)的患者相比，扩增等位基因似乎表现出相对严重的自主神经障碍表型，并更早地需要助行器。gydF4y2BangydF4y2Ba重复展开(gydF4y2Ba表1gydF4y2Ba)．gydF4y2Ba6gydF4y2Ba，gydF4y2Ba-gydF4y2Ba，gydF4y2Ba8gydF4y2Ba值得注意的是，2例(III、IV-2) 50岁前需坐轮椅，1例(IV-2)因严重吞咽困难需要管饲。个体V发病最早，在25岁左右，表型严重，临床累及上运动神经元，导致张力增加。灵敏的反射在RFC1疾病中很常见;然而，更多的运动特征和金字塔的迹象却很少被发现。在病例V中观察到痉挛性共济失调综合征，证实了在严重的RFC1疾病中临床上明显的上运动神经元累及的可能性。gydF4y2Ba

查看该表:gydF4y2Ba
表1gydF4y2Ba

中截断型变异患者的比较gydF4y2BaRFC1gydF4y2Ba和双等位(AAGGG)gydF4y2BangydF4y2Ba病人gydF4y2Ba

可以说，截断变异的识别gydF4y2BaRFC1gydF4y2Ba导致相对严重的表型也支持RFC1疾病的功能丧失模型，其中与双等位基因扩增相比，一个等位基因不产生或非常低的RFC1蛋白具有更严重的功能和临床后果。在携带1个截断变异的患者中，疾病的严重程度和临床表型可能受到第二个等位基因的扩展大小的影响。不幸的是，大多数病例没有足够的DNA来进行Southern blotting和验证这一假设。gydF4y2Ba

其他隐性遗传条件先前已与复合杂合致病变异/重复扩增基因型相关。例如，大约1%-4%的弗里德赖希共济失调患者在1个frataxin等位基因的致病范围内有异常扩增的GAA重复，而在另一个等位基因上有另一个基因内致病变异。gydF4y2Ba34gydF4y2Ba，gydF4y2Ba35gydF4y2Ba最近，非编码GCA和GCC重复扩增在复合杂合状态下与第二错义或截断变异被确定为导致另外2种罕见遗传疾病，谷氨酰胺酶缺乏症gydF4y2Ba36gydF4y2Ba以及巴拉特拉-斯科特综合症，gydF4y2Ba37gydF4y2Ba分别导致临床表型难以与双等位致病变异体患者区分。值得注意的是，在所有这些条件下，含有重复的基因的功能已经丧失。gydF4y2Ba

RFC1gydF4y2Ba似乎无法忍受功能丧失，只有11人出现gydF4y2BaRFC1gydF4y2BagnomAD v2.1.1上存在的251,000个等位基因的截断变异(等位基因频率= 0.00002)，观察/预期比值低于0.35 (o/e = 0.18, 90% CI = 0.12-0.3)，并且非常可能是功能丧失不耐受(pLI = 0.97)。gydF4y2Ba27gydF4y2Ba此外，只有18个gydF4y2BaRFC1gydF4y2Ba截断英格兰基因组公司WGS测序项目中150000个等位基因的变异，没有(AAGGG)gydF4y2BangydF4y2Ba第二个等位基因的扩展。gydF4y2Ba38gydF4y2Ba，gydF4y2Ba39gydF4y2Ba双等位基因截断变异在公共对照数据库或英国基因组学WGS中是不存在的，因为它们与生命不相容。gydF4y2Ba38gydF4y2Ba，gydF4y2Ba39gydF4y2Ba尽管如此，在这项研究中，患病患者的父母携带了一种截断变异gydF4y2BaRFC1gydF4y2Ba但在第二个等位基因上没有AAGGG扩增，尽管他们年老，但没有表现出表型，这表明RFC1单倍不足，尽管在一般人群中罕见，但是可以容忍的。事实上，不能排除含有重复的等位基因半合子表达的致病机制，当与正常蛋白共表达时，它不足以引起疾病。在这种情况下，可以假设，来自含有重复的等位基因的唯一可用的转录本可能对双等位基因扩增产生类似的有害影响，可能是通过获得有毒RNA或重复肽的功能。值得注意的是，在我们队列中2个独立家族中检测到的c.1267C>T (p.Arg423Ter)变体存在于gnomAD人群数据库中的2个个体中，一个是东亚血统，另一个是欧洲(非芬兰)血统。c.1267C>T突变确实发生在CG二核苷酸上，这可能解释了它对突变的易感性，它可能代表了CANVAS中更常见的致病变体。gydF4y2Ba

在7个具有典型CANVAS和1个扩展(AAGGG)等位基因的家族中，没有确定明确的原因，这表明CANVAS表型可能存在遗传异质性。我们的报告扩展了RFC1疾病的基因型谱，并具有直接的诊断意义。的确，尽管在我们的队列中很少见(7例vs 650多名携带双等位基因的人)gydF4y2BaRFC1gydF4y2Ba扩展，~ 1%)，与CANVAS相关的截断变量的发现表明fullgydF4y2BaRFC1gydF4y2Ba在受典型CANVAS影响并携带单等位基因(AAGGG)的病例中，建议进行测序gydF4y2BangydF4y2Ba扩张。gydF4y2Ba

研究资金gydF4y2Ba

这项工作得到了医学研究理事会(MR/T001712/1)、Cariplo基金会(批准号2019-1836)、遗传性神经病变联盟和伦巴第大区生物医学基金会(大区伦巴第大区，项目ID 1751723)的支持。H. Houlden和M.M. Reilly感谢MRC, Wellcome信托，MDA, MD UK, Ataxia UK, MSA信托，Rosetrees信托和NIHR UCLH BRC的赠款支持。E. Crespan感谢CARIPLO基金会(2019-1836)和意大利AIRC癌症研究基金会(Grant IG-2020, id24448)。R. Currò由欧洲神经病学学会(EAN) 2021年研究奖学金支持。半岛投注体育官网gydF4y2Ba

信息披露gydF4y2Ba

作者报告没有披露与手稿相关的信息。去gydF4y2Ba半岛投注体育官网Neurology.org/NgydF4y2Ba全面披露。gydF4y2Ba

鸣谢gydF4y2Ba

作者感谢Ulrich Hubscher教授提供抗rfc1抗体。作者也感谢患者及其家属参与这项研究。gydF4y2Ba

附录的作者gydF4y2Ba

表格gydF4y2Ba

脚注gydF4y2Ba

  • 去gydF4y2Ba半岛投注体育官网Neurology.org/NgydF4y2Ba全面披露。作者认为相关的资金信息和披露(如果有的话)将在文章末尾提供。gydF4y2Ba

  • 文章处理费由医学研究理事会资助。gydF4y2Ba

  • ↵gydF4y2Ba＊gydF4y2Ba这些作者对这项工作做出了同样的贡献。gydF4y2Ba

  • ↵gydF4y2Ba__gydF4y2Ba这些作者对这项工作做出了同样的贡献。gydF4y2Ba

  • 提交并经外部同行评审。处理编辑是Peter Hedera，医学博士。gydF4y2Ba

  • 收到了gydF4y2Ba2022年6月3日。gydF4y2Ba
  • 最终接受gydF4y2Ba2022年9月14日。gydF4y2Ba

这是一篇开放获取的文章，根据gydF4y2Ba创作共用署名许可4.0 (CC BY)gydF4y2Ba它允许在任何媒介上不受限制地使用、传播和复制，前提是正确地引用原始作品。gydF4y2Ba

参考文献gydF4y2Ba

  1. 1.gydF4y2Ba↵gydF4y2Ba
    1. SzmulewiczgydF4y2BaDJgydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    2. 罗伯茨gydF4y2BalgydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    3. 麦克莱恩gydF4y2BaCAgydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    4. MacDougallgydF4y2BaHGgydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    5. HalmagyigydF4y2Ba通用汽车gydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    6. 层gydF4y2BaEgydF4y2Ba
    。gydF4y2Ba小脑性共济失调伴神经病和前庭反射综合征(CANVAS)的建议诊断标准gydF4y2Ba。gydF4y2Ba神经临床实践。gydF4y2Ba2016gydF4y2Ba；gydF4y2Ba6gydF4y2Ba（gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)：gydF4y2Ba61gydF4y2Ba-gydF4y2Ba68gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
    OpenUrlgydF4y2Ba 摘要gydF4y2Ba/gydF4y2Ba免费的gydF4y2Ba全文gydF4y2Ba
  2. 2.gydF4y2Ba↵gydF4y2Ba
    1. CortesegydF4y2Ba一个gydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    2. Curro”gydF4y2BaRgydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    3. VegezzigydF4y2BaEgydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    4. 邱gydF4y2Ba王寅gydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    5. HouldengydF4y2BaHgydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    6. 赖利gydF4y2Ba毫米gydF4y2Ba
    。gydF4y2Ba小脑性共济失调，神经病变和前庭反射综合征(CANVAS):遗传和临床方面gydF4y2Ba。gydF4y2BaPract神经。gydF4y2Ba2022gydF4y2Ba；gydF4y2Ba22gydF4y2Ba（gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)：gydF4y2Ba14gydF4y2Ba-gydF4y2Ba18gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
    OpenUrlgydF4y2Ba 摘要gydF4y2Ba/gydF4y2Ba免费的gydF4y2Ba全文gydF4y2Ba
  3. 3.gydF4y2Ba↵gydF4y2Ba
    1. 亚当gydF4y2Ba国会议员gydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    2. ArdingergydF4y2BaHHgydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    3. 冰内生物gydF4y2Ba类风湿性关节炎gydF4y2Ba，gydF4y2Baet al。gydF4y2Ba
    1. CortesegydF4y2Ba一个gydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    2. 赖利gydF4y2Ba毫米gydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    3. HouldengydF4y2BaHgydF4y2Ba
    。gydF4y2BaRFC1 CANVAS/谱系障碍gydF4y2Ba。:gydF4y2Ba亚当gydF4y2Ba国会议员gydF4y2Ba，gydF4y2BaArdingergydF4y2BaHHgydF4y2Ba，gydF4y2Ba冰内生物gydF4y2Ba类风湿性关节炎gydF4y2Ba，gydF4y2Baet al。gydF4y2Ba、编辑。gydF4y2BaGeneReviews®gydF4y2Ba。gydF4y2Ba华盛顿大学西雅图分校gydF4y2Ba；gydF4y2Ba1993gydF4y2Ba。gydF4y2Bancbi.nlm.nih.gov /书/ NBK564656 /gydF4y2Ba。2021年1月5日访问。gydF4y2Ba
  4. 4.gydF4y2Ba↵gydF4y2Ba
    1. CortesegydF4y2Ba一个gydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    2. 西蒙gydF4y2BaRgydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    3. 沙利文gydF4y2BaRgydF4y2Ba，gydF4y2Baet al。gydF4y2Ba
    RFC1内含子重复的双等位基因扩增是迟发性共济失调的常见原因gydF4y2Ba。gydF4y2BaNat麝猫。gydF4y2Ba2019gydF4y2Ba；gydF4y2Ba51gydF4y2Ba（gydF4y2Ba4gydF4y2Ba)：gydF4y2Ba649gydF4y2Ba-gydF4y2Ba658gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
    OpenUrlgydF4y2Ba CrossRefgydF4y2Ba PubMedgydF4y2Ba
  5. 5.gydF4y2Ba↵gydF4y2Ba
    1. RafehigydF4y2BaHgydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    2. SzmulewiczgydF4y2BaDJgydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    3. 班尼特gydF4y2Ba曼氏金融gydF4y2Ba，gydF4y2Baet al。gydF4y2Ba
    基于生物信息学的扩增重复序列鉴定:RFC1中的非参比内含子五聚体扩增导致CANVASgydF4y2Ba。gydF4y2BaAm J Hum Genet。gydF4y2Ba2019gydF4y2Ba；gydF4y2Ba105gydF4y2Ba（gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)：gydF4y2Ba151gydF4y2Ba-gydF4y2Ba165gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
    OpenUrlgydF4y2Ba CrossRefgydF4y2Ba PubMedgydF4y2Ba
  6. 6.gydF4y2Ba↵gydF4y2Ba
    1. CortesegydF4y2Ba一个gydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    2. TozzagydF4y2Ba年代gydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    3. 邱gydF4y2Ba王寅gydF4y2Ba，gydF4y2Baet al。gydF4y2Ba
    由于RFC1重复扩张导致小脑性共济失调，神经病，前庭反射综合征gydF4y2Ba。gydF4y2Ba大脑。gydF4y2Ba2020gydF4y2Ba；gydF4y2Ba143gydF4y2Ba（gydF4y2Ba2gydF4y2Ba)：gydF4y2Ba480gydF4y2Ba-gydF4y2Ba490gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
    OpenUrlgydF4y2Ba CrossRefgydF4y2Ba PubMedgydF4y2Ba
  7. 7.gydF4y2Ba↵gydF4y2Ba
    1. CurrogydF4y2BaRgydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    2. SalvalaggiogydF4y2Ba一个gydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    3. TozzagydF4y2Ba年代gydF4y2Ba，gydF4y2Baet al。gydF4y2Ba
    RFC1扩张是特发性感觉神经病变的常见原因gydF4y2Ba。gydF4y2Ba大脑。gydF4y2Ba2021gydF4y2Ba；gydF4y2Ba144gydF4y2Ba（gydF4y2Ba5gydF4y2Ba)：gydF4y2Ba1542gydF4y2Ba-gydF4y2Ba1550gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
    OpenUrlgydF4y2Ba
  8. 8.gydF4y2Ba↵gydF4y2Ba
    1. TraschutzgydF4y2Ba一个gydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    2. CortesegydF4y2Ba一个gydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    3. 帝国gydF4y2Ba年代gydF4y2Ba，gydF4y2Baet al。gydF4y2Ba
    多系统RFC1疾病的自然史、表型谱和鉴别特征gydF4y2Ba。gydF4y2Ba半岛投注体育官网神经学。gydF4y2Ba2021gydF4y2Ba；gydF4y2Ba96gydF4y2Ba（gydF4y2Ba9gydF4y2Ba)：gydF4y2Bae1369gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
    OpenUrlgydF4y2Ba 摘要gydF4y2Ba/gydF4y2Ba免费的gydF4y2Ba全文gydF4y2Ba
  9. 9.gydF4y2Ba↵gydF4y2Ba
    1. GisatulingydF4y2Ba米gydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    2. DobricicgydF4y2BaVgydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    3. ZuhlkegydF4y2BaCgydF4y2Ba，gydF4y2Baet al。gydF4y2Ba
    共济失调综合征中RFC1基因五核苷酸重复扩增的临床谱gydF4y2Ba。gydF4y2Ba半岛投注体育官网神经学。gydF4y2Ba2020gydF4y2Ba；gydF4y2Ba95gydF4y2Ba（gydF4y2Ba21gydF4y2Ba)：gydF4y2Bae2912gydF4y2Ba-gydF4y2Bae2923gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
    OpenUrlgydF4y2Ba 摘要gydF4y2Ba/gydF4y2Ba免费的gydF4y2Ba全文gydF4y2Ba
  10. 10.gydF4y2Ba↵gydF4y2Ba
    1. MontautgydF4y2Ba年代gydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    2. DiedhiougydF4y2BaNgydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    3. FahrergydF4y2BaPgydF4y2Ba，gydF4y2Baet al。gydF4y2Ba
    法国多中心散发性共济失调队列中的双等位rfc1扩增gydF4y2Ba。gydF4y2BaJ神经。gydF4y2Ba2021gydF4y2Ba；gydF4y2Ba268gydF4y2Ba（gydF4y2Ba9gydF4y2Ba)：gydF4y2Ba3337gydF4y2Ba-gydF4y2Ba3343gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
    OpenUrlgydF4y2Ba CrossRefgydF4y2Ba
  11. 11.gydF4y2Ba↵gydF4y2Ba
    1. 范DaelegydF4y2Ba上海gydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    2. 维米尔gydF4y2Ba年代gydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    3. 范EesbeeckgydF4y2Ba一个gydF4y2Ba，gydF4y2Baet al。gydF4y2Ba
    不明原因成人小脑性共济失调患者RFC1重复扩增检测的诊断率gydF4y2Ba。gydF4y2Ba神经外科精神病学。gydF4y2Ba2020gydF4y2Ba；gydF4y2Ba91gydF4y2Ba（gydF4y2Ba11gydF4y2Ba)：gydF4y2Ba1233gydF4y2Ba-gydF4y2Ba1234gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
    OpenUrlgydF4y2Ba 免费的gydF4y2Ba全文gydF4y2Ba
  12. 12.gydF4y2Ba↵gydF4y2Ba
    1. Tagliapietra秀场gydF4y2Ba米gydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    2. CardellinigydF4y2BaDgydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    3. FerrarinigydF4y2Ba米gydF4y2Ba，gydF4y2Baet al。gydF4y2Ba
    伪装成慢性特发性轴突多发性神经病的RFC1 AAGGG重复扩增gydF4y2Ba。gydF4y2BaJ神经。gydF4y2Ba2021gydF4y2Ba；gydF4y2Ba268gydF4y2Ba（gydF4y2Ba11gydF4y2Ba)：gydF4y2Ba4280gydF4y2Ba-gydF4y2Ba4290gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
    OpenUrlgydF4y2Ba
  13. 13.gydF4y2Ba↵gydF4y2Ba
    1. ScribagydF4y2BaCKgydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    2. BeecroftgydF4y2BaSJgydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    3. 克莱顿gydF4y2BaJSgydF4y2Ba，gydF4y2Baet al。gydF4y2Ba
    在两个亚太CANVAS家族中发现新的RFC1重复基序(ACAGG)gydF4y2Ba。gydF4y2Ba大脑。gydF4y2Ba2020gydF4y2Ba；gydF4y2Ba143gydF4y2Ba（gydF4y2Ba10gydF4y2Ba)：gydF4y2Ba2904gydF4y2Ba-gydF4y2Ba2910gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
    OpenUrlgydF4y2Ba PubMedgydF4y2Ba
  14. 14.gydF4y2Ba↵gydF4y2Ba
    1. BeecroftgydF4y2BaSJgydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    2. CortesegydF4y2Ba一个gydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    3. 沙利文gydF4y2BaRgydF4y2Ba，gydF4y2Baet al。gydF4y2Ba
    CANVAS中的一个Māori特异性RFC1致病重复配置，可能是由于一个创始等位基因gydF4y2Ba。gydF4y2Ba大脑。gydF4y2Ba2020gydF4y2Ba；gydF4y2Ba143gydF4y2Ba（gydF4y2Ba9gydF4y2Ba)：gydF4y2Ba2673gydF4y2Ba-gydF4y2Ba2680gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
    OpenUrlgydF4y2Ba
  15. 15.gydF4y2Ba↵gydF4y2Ba
    1. 沙利文gydF4y2BaRgydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    2. 邱gydF4y2Ba王寅gydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    3. ChelbangydF4y2BaVgydF4y2Ba，gydF4y2Baet al。gydF4y2Ba
    rff1相关共济失调是早期多系统萎缩的模拟gydF4y2Ba。gydF4y2Ba神经外科精神病学。gydF4y2Ba2021gydF4y2Ba；gydF4y2Ba92gydF4y2Ba（gydF4y2Ba4gydF4y2Ba)：gydF4y2Ba444gydF4y2Ba-gydF4y2Ba446gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
    OpenUrlgydF4y2Ba 免费的gydF4y2Ba全文gydF4y2Ba
  16. 16.gydF4y2Ba↵gydF4y2Ba
    1. 沙利文gydF4y2BaRgydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    2. 邱gydF4y2Ba王寅gydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    3. ChelbangydF4y2BaVgydF4y2Ba，gydF4y2Baet al。gydF4y2Ba
    病理证实的多系统萎缩中不存在RFC1内含子重复扩增gydF4y2Ba。gydF4y2BaMov Disord。gydF4y2Ba2020gydF4y2Ba；gydF4y2Ba35gydF4y2Ba（gydF4y2Ba7gydF4y2Ba)：gydF4y2Ba1277gydF4y2Ba-gydF4y2Ba1279gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
    OpenUrlgydF4y2Ba PubMedgydF4y2Ba
  17. 17.gydF4y2Ba↵gydF4y2Ba
    1. HuingydF4y2BaVgydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    2. CoarelligydF4y2BaGgydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    3. GuemygydF4y2BaCgydF4y2Ba，gydF4y2Baet al。gydF4y2Ba
    由于RFC1扩展，CANVAS中的运动神经元病理gydF4y2Ba。gydF4y2Ba大脑。gydF4y2Ba2022gydF4y2Ba；gydF4y2Ba145gydF4y2Ba（gydF4y2Ba6gydF4y2Ba)：gydF4y2Ba2121gydF4y2Ba-gydF4y2Ba2132gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
    OpenUrlgydF4y2Ba
  18. 18.gydF4y2Ba↵gydF4y2Ba
    1. 库马尔gydF4y2Ba基米-雷克南gydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    2. CortesegydF4y2Ba一个gydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    3. 汤姆林森gydF4y2BaSEgydF4y2Ba，gydF4y2Baet al。gydF4y2Ba
    RFC1扩增可模拟伴有咳嗽和Sjögren综合征的遗传性感觉神经病gydF4y2Ba。gydF4y2Ba大脑。gydF4y2Ba2020gydF4y2Ba；gydF4y2Ba143gydF4y2Ba（gydF4y2Ba10gydF4y2Ba)：gydF4y2Bae82gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
    OpenUrlgydF4y2Ba
  19. 19.gydF4y2Ba↵gydF4y2Ba
    1. 赫曼gydF4y2BalgydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    2. GelderblomgydF4y2Ba米gydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    3. 贝斯特尔gydF4y2Ba米gydF4y2Ba，gydF4y2Baet al。gydF4y2Ba
    由双等位基因五核苷酸扩增引起的多系统神经退行性变gydF4y2Ba。gydF4y2Ba帕金森相关疾病。gydF4y2Ba2022gydF4y2Ba；gydF4y2Ba95gydF4y2Ba：gydF4y2Ba54gydF4y2Ba-gydF4y2Ba56gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
    OpenUrlgydF4y2Ba
  20. 20.gydF4y2Ba↵gydF4y2Ba
    1. AbramzongydF4y2BaYgydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    2. 政府高级官员gydF4y2BaRgydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    3. CortesegydF4y2Ba一个gydF4y2Ba，gydF4y2Baet al。gydF4y2Ba
    研究零星肌萎缩性侧索硬化症患者的RFC1扩增gydF4y2Ba。gydF4y2Ba神经科学。gydF4y2Ba2021gydF4y2Ba；gydF4y2Ba430gydF4y2Ba：gydF4y2Ba118061gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
    OpenUrlgydF4y2Ba
  21. 21.gydF4y2Ba↵gydF4y2Ba
    1. 自我SyrianigydF4y2BaDgydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    2. 黄gydF4y2BaDgydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    3. AndanigydF4y2Ba年代gydF4y2Ba，gydF4y2Baet al。gydF4y2Ba
    rfc1介导的脊髓小脑性共济失调在北美共济失调队列中的患病率gydF4y2Ba。gydF4y2Ba神经麝猫。gydF4y2Ba2020gydF4y2Ba；gydF4y2Ba6gydF4y2Ba（gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba)：gydF4y2Bae440gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
    OpenUrlgydF4y2Ba 摘要gydF4y2Ba/gydF4y2Ba免费的gydF4y2Ba全文gydF4y2Ba
  22. 22.gydF4y2Ba↵gydF4y2Ba
    1. 李gydF4y2BaHgydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    2. 德宾gydF4y2BaRgydF4y2Ba
    。gydF4y2Ba快速和准确的短读对齐与Burrows-Wheeler变换gydF4y2Ba。gydF4y2Ba生物信息学。gydF4y2Ba2009gydF4y2Ba；gydF4y2Ba25gydF4y2Ba（gydF4y2Ba14gydF4y2Ba)：gydF4y2Ba1754gydF4y2Ba-gydF4y2Ba1760gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
    OpenUrlgydF4y2Ba CrossRefgydF4y2Ba PubMedgydF4y2Ba
  23. 23.gydF4y2Ba↵gydF4y2Ba
    1. 麦肯纳gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    2. 汉娜gydF4y2Ba米gydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    3. 银行gydF4y2BaEgydF4y2Ba，gydF4y2Baet al。gydF4y2Ba
    基因组分析工具包:用于分析下一代DNA测序数据的MapReduce框架gydF4y2Ba。gydF4y2Ba基因组Res。gydF4y2Ba2010gydF4y2Ba；gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba（gydF4y2Ba9gydF4y2Ba)：gydF4y2Ba1297gydF4y2Ba-gydF4y2Ba1303gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
    OpenUrlgydF4y2Ba 摘要gydF4y2Ba/gydF4y2Ba免费的gydF4y2Ba全文gydF4y2Ba
  24. 24.gydF4y2Ba↵gydF4y2Ba
    1. 麦克拉伦gydF4y2BaWgydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    2. 吉尔gydF4y2BalgydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    3. 亨特gydF4y2BaSEgydF4y2Ba，gydF4y2Baet al。gydF4y2Ba
    综变效应预测器gydF4y2Ba。gydF4y2Ba基因组医学杂志。gydF4y2Ba2016gydF4y2Ba；gydF4y2Ba17gydF4y2Ba（gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)：gydF4y2Ba122gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
    OpenUrlgydF4y2Ba CrossRefgydF4y2Ba PubMedgydF4y2Ba
  25. 25.gydF4y2Ba↵gydF4y2Ba
    1. AutongydF4y2Ba一个gydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    2. 布鲁克斯gydF4y2BaLDgydF4y2Ba，gydF4y2Baet al。gydF4y2Ba
    千人基因组计划联盟gydF4y2Ba，gydF4y2BaAutongydF4y2Ba一个gydF4y2Ba，gydF4y2Ba布鲁克斯gydF4y2BaLDgydF4y2Ba，gydF4y2Baet al。gydF4y2Ba人类遗传变异的全球参考gydF4y2Ba。gydF4y2Ba大自然。gydF4y2Ba2015gydF4y2Ba；gydF4y2Ba526gydF4y2Ba（gydF4y2Ba7571gydF4y2Ba)：gydF4y2Ba68gydF4y2Ba-gydF4y2Ba74gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
    OpenUrlgydF4y2Ba CrossRefgydF4y2Ba PubMedgydF4y2Ba
  26. 26.gydF4y2Ba↵gydF4y2Ba
    国家心肺血液研究所(NHLBI)。GO外显子组测序项目(ESP)gydF4y2Ba。gydF4y2Bahttps://evs.gs.washington.edugydF4y2Ba
  27. 27.gydF4y2Ba↵gydF4y2Ba
    1. 列克gydF4y2Ba米gydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    2. KarczewskigydF4y2BaKJgydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    3. MinikelgydF4y2Ba电动汽车gydF4y2Ba，gydF4y2Baet al。gydF4y2Ba
    60,706人蛋白质编码遗传变异分析gydF4y2Ba。gydF4y2Ba大自然。gydF4y2Ba2016gydF4y2Ba；gydF4y2Ba536gydF4y2Ba（gydF4y2Ba7616gydF4y2Ba)：gydF4y2Ba285gydF4y2Ba-gydF4y2Ba291gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
    OpenUrlgydF4y2Ba CrossRefgydF4y2Ba PubMedgydF4y2Ba
  28. 28.gydF4y2Ba↵gydF4y2Ba
    1. PascuccigydF4y2BaBgydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    2. StuckigydF4y2Ba米gydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    3. 琼森gydF4y2Ba佐薇gydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    4. DogliottigydF4y2BaEgydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    5. HubschergydF4y2BaUgydF4y2Ba
    。gydF4y2Ba用纯化的人蛋白进行长斑块基切除修复:DNA连接酶I作为DNA聚合酶δ和ε*的斑块大小中介物gydF4y2Ba。gydF4y2Ba生物化学。gydF4y2Ba1999gydF4y2Ba；gydF4y2Ba274gydF4y2Ba（gydF4y2Ba47gydF4y2Ba)：gydF4y2Ba33696gydF4y2Ba-gydF4y2Ba33702gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
    OpenUrlgydF4y2Ba 摘要gydF4y2Ba/gydF4y2Ba免费的gydF4y2Ba全文gydF4y2Ba
  29. 29.gydF4y2Ba↵gydF4y2Ba
    1. ŠušnjargydF4y2BaUgydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    2. ŠkrabargydF4y2BaNgydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    3. 棕色（的）gydF4y2Ba艾尔gydF4y2Ba，gydF4y2Baet al。gydF4y2Ba
    细胞环境对TDP-43功能的影响与神经和肌肉疾病有关gydF4y2Ba。gydF4y2BaCommun杂志。gydF4y2Ba2022gydF4y2Ba；gydF4y2Ba5gydF4y2Ba（gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)：gydF4y2Ba314gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
    OpenUrlgydF4y2Ba
  30. 30.gydF4y2Ba↵gydF4y2Ba
    1. 多布林gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    2. 戴维斯gydF4y2BaCAgydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    3. 施莱辛格gydF4y2BaFgydF4y2Ba，gydF4y2Baet al。gydF4y2Ba
    STAR:超快通用RNA-seq对准器gydF4y2Ba。gydF4y2Ba生物信息学。gydF4y2Ba2013gydF4y2Ba；gydF4y2Ba29gydF4y2Ba（gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)：gydF4y2Ba15gydF4y2Ba-gydF4y2Ba21gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
    OpenUrlgydF4y2Ba CrossRefgydF4y2Ba PubMedgydF4y2Ba
  31. 31.gydF4y2Ba↵gydF4y2Ba
    1. 史密斯gydF4y2BaTSgydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    2. Heger (gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    3. SudberygydF4y2Ba我gydF4y2Ba
    。gydF4y2Baumi -工具:在唯一分子标识符中建模测序错误，以提高量化精度gydF4y2Ba。gydF4y2Ba基因组Res。gydF4y2Ba2017gydF4y2Ba；gydF4y2Ba27gydF4y2Ba（gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba)：gydF4y2Ba491gydF4y2Ba-gydF4y2Ba499gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
    OpenUrlgydF4y2Ba 摘要gydF4y2Ba/gydF4y2Ba免费的gydF4y2Ba全文gydF4y2Ba
  32. 32.gydF4y2Ba↵gydF4y2Ba
    1. 廖gydF4y2BaYgydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    2. 史密斯gydF4y2Ba门将gydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    3. 史gydF4y2BaWgydF4y2Ba
    。gydF4y2Bafeaturerts:一个高效的通用程序，用于分配序列读取基因组特征gydF4y2Ba。gydF4y2Ba生物信息学。gydF4y2Ba2014gydF4y2Ba；gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba（gydF4y2Ba7gydF4y2Ba)：gydF4y2Ba923gydF4y2Ba-gydF4y2Ba930gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
    OpenUrlgydF4y2Ba CrossRefgydF4y2Ba PubMedgydF4y2Ba
  33. 33.gydF4y2Ba↵gydF4y2Ba
    1. 马蒂松gydF4y2BaTgydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    2. 弗兰肯gydF4y2BaHgydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    3. 辛斯gydF4y2BaJgydF4y2Ba，gydF4y2Baet al。gydF4y2Ba
    原代细胞蛋白质周转的系统分析gydF4y2Ba。gydF4y2BaNat Commun。gydF4y2Ba2018gydF4y2Ba；gydF4y2Ba9gydF4y2Ba（gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)：gydF4y2Ba689gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
    OpenUrlgydF4y2Ba CrossRefgydF4y2Ba PubMedgydF4y2Ba
  34. 34.gydF4y2Ba↵gydF4y2Ba
    1. 亚当gydF4y2Ba国会议员gydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    2. ArdingergydF4y2BaHHgydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    3. 冰内生物gydF4y2Ba类风湿性关节炎gydF4y2Ba，gydF4y2Baet al。gydF4y2Ba
    1. BidichandanigydF4y2Ba如果gydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    2. DelatyckigydF4y2BaMBgydF4y2Ba
    。gydF4y2BaFriedreich共济失调gydF4y2Ba。:gydF4y2Ba亚当gydF4y2Ba国会议员gydF4y2Ba，gydF4y2BaArdingergydF4y2BaHHgydF4y2Ba，gydF4y2Ba冰内生物gydF4y2Ba类风湿性关节炎gydF4y2Ba，gydF4y2Baet al。gydF4y2Ba、编辑。gydF4y2BaGeneReviews®gydF4y2Ba。gydF4y2Ba华盛顿大学西雅图分校gydF4y2Ba；gydF4y2Ba1993gydF4y2Ba。gydF4y2Bancbi.nlm.nih.gov /书/ NBK1281 /gydF4y2Ba.访问时间为2022年2月11日。gydF4y2Ba
  35. 35.gydF4y2Ba↵gydF4y2Ba
    1. 烹饪gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    2. GiuntigydF4y2BaPgydF4y2Ba
    。gydF4y2Ba弗里德里希共济失调:临床特征、发病机制及治疗gydF4y2Ba。gydF4y2BaBr Med Bull。gydF4y2Ba2017gydF4y2Ba；gydF4y2Ba124gydF4y2Ba（gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)：gydF4y2Ba19gydF4y2Ba-gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
    OpenUrlgydF4y2Ba CrossRefgydF4y2Ba PubMedgydF4y2Ba
  36. 36.gydF4y2Ba↵gydF4y2Ba
    1. 范KuilenburggydF4y2BaABPgydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    2. Tarailo-GraovacgydF4y2Ba米gydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    3. 里士满gydF4y2Ba巴勒斯坦权力机构gydF4y2Ba，gydF4y2Baet al。gydF4y2Ba
    GLS短串联重复扩增引起谷氨酰胺酶缺乏gydF4y2Ba。gydF4y2BaN英语J医学。gydF4y2Ba2019gydF4y2Ba；gydF4y2Ba380gydF4y2Ba（gydF4y2Ba15gydF4y2Ba)：gydF4y2Ba1433gydF4y2Ba-gydF4y2Ba1441gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
    OpenUrlgydF4y2Ba CrossRefgydF4y2Ba PubMedgydF4y2Ba
  37. 37.gydF4y2Ba↵gydF4y2Ba
    1. 拉克鲁瓦gydF4y2BaAJgydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    2. StableygydF4y2BaDgydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    3. SahraouigydF4y2BaRgydF4y2Ba，gydF4y2Baet al。gydF4y2Ba
    GGC重复扩增和XYLT1外显子1甲基化是baratela-scott综合征常见的致病变异gydF4y2Ba。gydF4y2BaAm J Hum Genet。gydF4y2Ba2019gydF4y2Ba；gydF4y2Ba104gydF4y2Ba（gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)：gydF4y2Ba35gydF4y2Ba-gydF4y2Ba44gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
    OpenUrlgydF4y2Ba CrossRefgydF4y2Ba PubMedgydF4y2Ba
  38. 38.gydF4y2Ba↵gydF4y2Ba
    1. 科斯切尔尼gydF4y2BaGgydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    2. YaikhomgydF4y2BaGgydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    3. 艾耶gydF4y2BaVgydF4y2Ba，gydF4y2Baet al。gydF4y2Ba
    国际小鼠表型联盟门户网站，敲除小鼠和相关表型数据的统一访问点gydF4y2Ba。gydF4y2Ba核酸测定。gydF4y2Ba2014gydF4y2Ba；gydF4y2Ba42gydF4y2Ba（gydF4y2Ba数据库问题gydF4y2Ba)：gydF4y2BaD802gydF4y2Ba-gydF4y2BaD809gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
    OpenUrlgydF4y2Ba CrossRefgydF4y2Ba PubMedgydF4y2Ba
  39. 39.gydF4y2Ba↵gydF4y2Ba
    1. KarczewskigydF4y2BaKJgydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    2. FrancioligydF4y2Ba信用证gydF4y2Ba，gydF4y2Ba
    3. 挑gydF4y2BaGgydF4y2Ba，gydF4y2Baet al。gydF4y2Ba
    从144,456人的变异中量化了突变约束谱gydF4y2Ba。gydF4y2Ba大自然。gydF4y2Ba2020gydF4y2Ba；gydF4y2Ba581gydF4y2Ba（gydF4y2Ba7809gydF4y2Ba)：gydF4y2Ba434gydF4y2Ba-gydF4y2Ba443gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
    OpenUrlgydF4y2Ba CrossRefgydF4y2Ba PubMedgydF4y2Ba

信件:快速在线通信gydF4y2Ba

本文尚未发表评论。gydF4y2Ba
评论gydF4y2Ba

需求gydF4y2Ba

如果你要上传关于文章的信件:gydF4y2Ba
您必须在六个月内更新您的披露:gydF4y2Bahttp://submit.半岛投注体育官网neurology.orggydF4y2Ba

您的合著者必须发送一份完整的gydF4y2Ba出版协议表格gydF4y2Ba来gydF4y2Ba半岛投注体育官网(对于主要/通讯作者不需要填写以下表格即可)，然后再上传您的评论。gydF4y2Ba

如果你在回复一篇关于你最初撰写的文章的评论:gydF4y2Ba
您(和共同作者)不需要填写表格或检查披露，因为作者表格仍然有效gydF4y2Ba
并适用于信件。gydF4y2Ba

提交规格:gydF4y2Ba

  • 文章必须少于200字，参考文献少于5篇。参考文献1必须是你所评论的文章。gydF4y2Ba
  • 投稿者不得超过5人。(例外:原作者回复可以包括文章的所有原作者)gydF4y2Ba
  • 只可提交发稿日起6个月内发表的文章。gydF4y2Ba
  • 不要冗余。在提交之前阅读文章上已经发布的任何评论。gydF4y2Ba
  • 提交的意见在发表前须经过编辑和编辑审查。gydF4y2Ba

更多关于争议和辩论的指南和信息gydF4y2Ba

写评论gydF4y2Ba

更多关于文本格式的信息gydF4y2Ba

纯文本gydF4y2Ba

  • 不允许使用HTML标记。gydF4y2Ba
  • 网页地址和电子邮件地址会自动变成链接。gydF4y2Ba
  • 行和段自动中断。gydF4y2Ba
作者信息gydF4y2Ba
注意:第一作者必须是注释的通讯作者。gydF4y2Ba
名字，名，名“彼得”。gydF4y2Ba
你的姓或姓。“MacMoody”。gydF4y2Ba
你的电子邮件地址，例如higgs-boson@gmail.comgydF4y2Ba
你的角色和/或职业。“整形外科医生”。gydF4y2Ba
所属机构或机构(如适用)，例如"皇家自由医院"gydF4y2Ba
出版协议gydF4y2Ba
注意:gydF4y2Ba除第一作者/通讯作者外，所有作者必须单独填写一份gydF4y2Ba出版协议表格gydF4y2Ba并在发表评论之前通过电子邮件提供给编辑部。gydF4y2Ba
验证码gydF4y2Ba
这个问题是为了测试你是否是一个人类访问者，并防止自动发送垃圾邮件。gydF4y2Ba

垂直制表符gydF4y2Ba

你可能也感兴趣gydF4y2Ba

回到顶部gydF4y2Ba
广告gydF4y2Ba

相关文章gydF4y2Ba

  • 没有相关文章。gydF4y2Ba

主题讨论gydF4y2Ba

提醒我gydF4y2Ba